Подкожный овод

gasterophilus intestinalis 270 ovod 1

У коров и особенно у молодняка крупного рогатого скота, начиная с середины февраля, при прощупывании в области спины обнаруживаются небольшие возвышения кожи — желваки. В каждом из них находится зрелая личинка подкожного овода, которая в апреле — мае продырявливает кожу и выходит наружу.

Пораженость скота подкожным оводом, кроме снижения продуктивности, вызывает резкое ухудшение качества кожи.

Гипс-дерматоз - паразитарное заболевание крупно о рогатого скота, вызываемое личинками подкожного овода H.lineatuin V и H.bovis. На территории Российской Федерации широко распространены оба вида подкожных оводов. Ущерб, причиняемый личинками овода, складывается из потерь молока и мяса, порчи кожевенного сырья. По данным В.К. Метелицы (1983) потери при гиподерматозе крупного рогатого скота складываются из снижения на 8% прироста массы тела молодняка, на 9% (200 л молока в год на корову) молочной продуктивности и снижения на 50-55% качества шкур. Личинки подкожного овода, паразитируя в организме крупного рогатого скота, наносят непоправимый ущерб его здоровью, повреждая внутренние органы и ткани, кожный покров. Личинки I стадии подкожного овода выделяют три основных фермента - гиподермины А (НА), В (НВ) и С (НС), которые играют важную роль в жизнедеятельности паразита (1). Гиподермины А и В эффективно разрушают иммуноглобулины крупного рогатого скота, понижая их биологическую активность, снижают пролиферацию лейкоцитов (2). Гиподермин С обладает гистологической и дермолитической активностью, способствуя передвижению паразита внутри организма животного (3). Кроме того, выделяемые личинками оводов ферменты могут оказывать крайне негативное воздействие на организм хозяина в целом. Установлено, что при введении содержимого личинок I стадии подкожного овода в организм кролика, у подопытного животного наблюдается резкое снижение свёртываемости крови, повышение артериального давления, изменения в зародышевых клетках. Материалы и методы

Очищенный гиподермин С получали путём очистки личиночного гомогената с помощью ионообменной хроматографии на DEAE-сефа-розе (5). Степень чистоты и подлинность полученного гиподермина С устанавливали SDS-электрофорезом в 12% полиакриламидном геле, а специфичность - в непрямом иммуноферментном анализе с сыворотками крови крупного рогатого скота, содержащими и не содержащими антитела кгиподермину С.

Сыворотки крови крупного рогатого скота получали из хозяйств Смоленской и Брянской областей в октябре-ноябре месяце. Сыворотки хранили при -200С.

Положительные и отрицательные сыворотки крови крупного рогатого скота на содержание в них антител к возбудителю гиподерматоза определяли с помощью коммерческого набора "Гиподерма-серотест. (АНО НИИДПБ, г. Москва).

Моноклональные антитела получали путём иммунизации мышей линии BALB/c очищенным гиподермином С. Гибридизацию проводили по методу Kohler, Milstain, 1976 г. Культуральные жидкости тестировали на наличие антител к гиподермину С в иммуноферментном анализе. Клоны, обнаруживающие специфическую активность, реклонировали методом лимитирующих разведений. Позитивные реклонированные гибридомы наращивали в культуральных флаконах, увеличивая обьём (Greiner, Германия). Асцитные жидкости, содержащие моноклональные антитела, получали после введения гибридомных клеток в брюшную полость праймированных мышей линии BALB/c. Очистку моноклональных антител из асцитной жидкости осуществляли путём осаждения белков при помощи каприловой кислоты (Sigma, США). Определение субкласса моноклональных антител, синтезируемых гибридомными клеточными линиями, проводили методом иммуноферментного анализа с помощьюнабора "Mouse-Hybridoma-Subtyping Kit" (Sigma, США).

Поликлональные антитела к гиподермину С получали путём 2-х стадийной иммунизации кролика очищенным продуктом. Из полученной гипериммунной сыворотки выделяли глобулиновую фракцию путём осаждения её сульфатом аммония. Очистку поликлональных антител проводили на полиакриламидном иммуносорбенте, содержащем в качестве лиганда очищеный гиподермин С.

Приготовление коньюгата (поликлональные антитела меченые пероксидазой хрена) проводили по методу P.K.Nakane и A.Kawaoi (1974 г.).

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Нажимая на кнопку «Отправить», я даю свое согласие на обработку персональных данных