Добавить в закладки:

М.Н.Якунина1, Т.С.Новик2, Т.С.Стерлина2, Н.А.Колесникова2, В.А.Мосин2, В.А.Дриняев2

1   - РОНЦ «Клиника экспериментальной терапии» (Москва);

2    - ООО НПЦ «Фармбиомед» (Москва)

 

Собак со спонтанной трансмиссивной (венерической) саркомой лечили химиотерапевтическими препаратами винкристином и циклофосфаном без применения сарколитина (контрольная группа) и с применением сарколитина как средства повышения их эффективности (опытная группа). Показано, что применение сарколитина повышает эффективность химиопрепаратов до 100%, устраняет их миелогоксическое действие и повышает переносимость лечения в целом, сокращает число курсов химиотерапии и общую продолжительность лечения, делает ненужным дополнительный метод лечения (электокоагуляцию) и экономически более выгодно.

Ключевые слова: собака, трансмиссивная саркома, химиотерапия, множественная лекарственная устойчивость, авермектины, сарколитин.

 

Трансмиссивная или венерическая саркома (ТВС) - широко распространенное и хорошо известное ветеринарным специалистам заболевание, которое встречается только у собак. Обычно опухоль развивается на слизистых оболочках наружных половых органов, но встречаются и экстрагенитальные локализации. Характерная отличительная особенность ТВС - контагиозность, т.е. способность передаваться от собаки к собаке половым путем. В то же время по микроскопическому строению она имеет все признаки злокачественной опухоли, и ее следует относить к группе сарком альвеолярного типа.

В настоящее время, по мнению большинства отечественных и зарубежных специалистов, основным методом лечения ТВС является химиотерапия. Схемы химиотерапии ТВС разнообразны, хорошие результаты получены при использовании винкристина, как в виде монотерапии, так и, в более запущенных случаях, в сочетании с циклофосфаном. Полного выздоровления обычно удается добиться за 4-8 курсов. При неудовлетворительном результате химиотерапия может быть дополнена лучевым или оперативным лечением.

Однако при химиотерапии довольно часто наблюдаются осложнения, среди которых основным является угнетающее действие химиопрепаратов на кроветворные органы. Поэтому препараты, способные уменьшить миелотоксичность цитостатиков и сократить продолжительность лечения, не снижая его эффективности, могут оказаться очень востребованными при лечении онкологических заболеваний человека и животных.

В этой связи представляют интерес работы, в которых сообщается, что препараты, разработанные на основе многокомпонентных авермектинсодержащих субстанций, не только сами подавляют рост опухолей, но и существенно увеличивают эффективность некоторых химиотерапевтических средств в опытах invitroи invivo. Было показано, что эти эффекты связаны преимущественно с одним из компонентов комплекса, авермектином А1, и проявлялся в малых концентрациях (до 0,3 мкг/мл). В то же время однокомпонентные авермектинсодержащие субстанции (ивермектин, абамектин) и препараты на их основе, которые широко известны как противопаразитарные средства, таким действием в указанных концентрациях не обладают [1-6].

На основе многокомпонентной авермектинсодержащей субстанции со сниженным содержанием авермектина В1 группой компаний «Фармбиомед» разработан ветеринарный лекарственный препарат сарколитин® К-9 (sarkolitin®К-9), предназначенный для использования в качестве модулятора противоопухолевой активности цитостатиков [7].

Целью настоящей работы является проверка в клинических условиях эффективности и переносимости препарата при лечении трансмиссивной венерической саркомы собак.

Материалы и методы

Работу проводили на базе медико-биологического кооператива «БиоКонтроль» на собаках со спонтанной ТВС. Диагноз ставили на основании клинических признаков и результатов цитологического исследования опухоли.

Из собак различных пород, обоего пола, в возрасте от 1 года до 12 лет, с подтвержденным диагнозом трансмиссивной саркомы, по мере их поступления сформировали две группы по 10 голов в каждой. У всех собак измеряли размер опухоли и брали кровь для клинического анализа.

Собак контрольной группы лечили по традиционной схеме: им вводили винкристин из расчета 0,5 мг/м2 и циклофосфан из расчета 300 мг/м2, внутривенно, струйно, раздельно.

Собакам опытной группы вводили то же самое (винкристин из расчета 0,5 мг/м2 и циклофосфан из расчета 300 мг/м2, внутривенно, струйно, раздельно), но дополнительно через 15 минут после последней инъекции химиопрепарата вводили подкожно сарколитин в дозе 0,25 мг/кг массы тела.

Лечение проводили курсами. Эффективность каждого курса оценивали по общепринятой методике (пальпация, измерение размера опухоли, биопсия), одновременно оценивали общее состояние собак и изменения гематологических показателей. При удовлетворительном состоянии животного назначали следующий курс лечения, при ухудшении состояния собаки - в первую очередь при появлении выраженной миелосупресии - лечение прерывали. Обычно интервал межу курсами составлял 1-2 недели.

Статистическую обработку данных проводили общепринятыми методами.

Уход, кормление и содержание собак осуществляли их владельцы с учетом рекомендаций сотрудников клиники.

Результаты

В процессе лечения размер опухолей, выраженный в процентах от исходной величины, уменьшался у собак обеих групп (рис. 1). Однако динамика регрессии опухолей в контрольной и опытной группах была различной.

В опытной группе размер опухолей уже после первого курса снизился более чем наполовину и составил всего 46,7% от исходного, после второго - 22,2%, после третьего - 3,2%, а после пятого курса все собаки были здоровы, что было подтверждено цитологическими исследованиями.

В контрольной группе размер опухолей после первого курса уменьшился приблизительно на треть, до 72,4%, а после второго курса даже несколько увеличился (84,2%). Дальнейшая регрессия опухолей происходила медленно, после четвертого и пятого курсов их размер сохранялся практически на одном и том же уровне (20,8 и 19,3%), и даже после шестого курса химиотерапии добиться полного их нивелирования не удалось (0,5%). Различия между группами статистически достоверны (р≤0,05).

Если сравнивать число выздоровевших собак в опытной и контрольной группе и оценивать скорость их выздоровления, то различия получаются еще более наглядными (рис. 2). Результаты первого курса лечения одинаковы для обеих групп - не выздоровела ни одна собака. Но затем в опытной группе после второго курса выздоровели две собаки, после третьего их было уже 7, после четвертого - 8, а после пятого курса были здоровы все 10 собак, набранных в опытную группу. В контрольной группе первые две выздоровевшие собаки появились после третьего курса, после четвертого к ним прибавились еще две, у остальных шести собак получить радикальный эффект только химиотерапией не удалось, и трем собакам была дополнительно проведена электрокоагуляция опухоли после пятого курса химиотерапии, еще трем - после шестого. Иными словами, в контрольной группе химиотерапия оказалась эффективной только в 40% случаев (4 собаки из 10), и потребовался дополнительный способ лечения (электрокоагуляция).

Как видно, и число курсов лечения, и продолжительность лечения оказывались для каждой собаки разными, но для статистически достоверной оценки схем лечения мы определили средние данные по каждой группе (таблица 1). Из них следует, что в опытной группе в среднем потребовалось на один курс лечения меньше, но разница в общей длительности лечения более существенна: на лечение собак опытной группы потребовалось почти в два раза меньше времени, причем разница статистически достоверна (р≤0,05).

Таблица 1

Число курсов и общая продолжительность химиотерапии в зависимости от схемы лечения

схема лечения

число курсов (М±m)

продолжительность лечения, дни (М±m)

опыт

винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 + сарколитин 0,25 мг/кг

3,3±0,3

42,7±4,8

контроль

винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 без сарколитина

4,7±0,5

75,2±16,1

Следовательно, при сочетании традиционной химиотерапии с сарколитином не только повышается ее эффективность (с 40 до 98-100%), но и значительно сокращается продолжительность лечения.

Но продолжительность лечения определяется не только скоростью регрессии опухоли. Общеизвестна способность цитостатиков вызывать миелосупрессию и другие, менее значимые побочные реакции. В результате лечение приходится приостанавливать до восстановления гематологических показателей до приемлемого уровня, и это вторая причина увеличения продолжительности лечения.

Изменения гематологических показателей в процессе лечения в зависимости от использованной схемы представлены на рис. 3-5.

Как видно из представленных данных, у всех собак отмечается незначительная гипохромная анемия (снижение содержания эритроцитов и гемоглобина), вероятно, из-за постоянных кровянистых выделений, характерных для ТВС; содержание тромбоцитов тоже немного понижено. Однако эти показатели у здоровых животных колеблются в довольно широких пределах и полученные величины настолько незначительно отличаются от показателей условно здоровых собак, обследованных в той же клинике, что их можно считать нижней границей нормы. В процессе лечения у собак опытной группы они практически не изменяются (можно говорить об очень незначительном повышении гемоглобина и тромбоцитов к концу лечения); у собак контрольной группы отмечается их небольшое снижение, особенно к концу лечения.

Совсем иные изменения происходят с содержанием лейкоцитов. Уже после первого курса наблюдалось снижение их количества. После второго курса лечения у собак контрольной группы число лейкоцитов составляло только 2,34 тыс./мкл, после четвертого — 2,36 тыс./мкл; если говорить об индивидуальных показателях, то у четырех собак лейкоциты снижались даже до значения 1,2 тыс./мкл. Все это свидетельствовало о выраженной миелосупрессии и было причиной перерыва в лечении у всех собак контрольной группы: у девяти из десяти собак дважды, у одной собаки лечение приостанавливали три раза. У собак опытной группы минимальное содержание лейкоцитов, отмеченное после второго курса лечения, составляло 5,94 тыс./мкл, и необходимости приостанавливать лечение не было ни у одной собаки.

Следовательно, при сочетании традиционной химиотерапии с сарколитином снижается токсичность химиопрепаратов и не возникает необходимости в перерывах в лечении.

Обсуждение

Первый результат, на который стоит обратить внимание - применение сарколитина повышает эффективность традиционной химиотерапии с 40 до 98-100%. Объяснение этому можно найти в способности многокомпонентного комплекса в целом и его компонента авермектина A1блокировать активность транспортных белков клеток, обеспечивающих множественную лекарственную устойчивость (МЛУ) опухолей [3-6]. Правда, большинство исследователей считает, что клетки ТВС устойчивости к химиопрепаратам не развивают. Не имея по этому вопросу никаких собственных данных, мы тем не менее хотим сказать, что подавление активности транспортных белков в любом случае должно повышать эффективность химиотерапии. Все транспортные белки являются нормальными компонентами клеток, обеспечивая саму возможность их существования, и формирование МЛУ - всего лишь крайний вариант нормального механизма [8]. Показано, что добавление многокомпонентного авермектинового комплекса или авермектина А1 в культуру опухолевых клеток, где присутствует винкристин в недействующей концентрации, вызывало их гибель [4,5]. В нашей работе мы не могли себе позволить изменить стандартную схему лечения, поскольку работали не с экспериментальными, а просто с больными собаками, но можем предположить, что совместное применение сарколитина и цитостатиков позволит снизить дозу последних, что мы собираемся проверить в своих дальнейших исследованиях. Пока же повторим - применение сарколитина повышает эффективность стандартной химиотерапии, снижая тем самым число курсов лечения и его общую продолжительность, и позволяет обходиться без дополнительного (хирургического) способа лечения.

Второй, не менее важный результат - снижение (у некоторых собак полное устранение) гемотоксического действия противоопухолевых средств и повышение переносимости лечения в целом (что хорошо видно по поведению собак - они явно себя лучше чувствуют). О механизмах этого действия мы можем высказать только предположения. Один из возможных вариантов заключается именно в избирательности противоопухолевого действия самой субстанции - препарат вызывает гибель недифференцированных клеток и защищает от гибели нормальные (здоровые) клетки [9,10]. Улучшение общего состояния животных может быть еще связано и со способностью субстанции повышать неспецифический иммунитет (Новик Т.С., неопубликованные данные). Практическая значимость этого эффекта в том, что он позволяет не прерывать химиотерапию по причине миелосупрессии, тем самым сокращая опять же продолжительность лечения и улучшая состояние животных.

В заключение мы хотели бы сравнить экономическую эффективность двух схем лечения: только химиотерапии (контроль) и химиотерапии в комбинации с сарколитином (опыт). Стоимость одного курса складывается из стоимости собственно химиотерапевтических препаратов, сарколитина, вспомогательных материалов (спирт, вата, шприцы и т.п.) и собственно стоимости процедуры. Мы будем проводить сравнение только по стоимости препаратов, из расчета на одну условную собаку весом 30 кг, с площадью поверхности тела 0,96        м2. Цены винкристина (Винкристин-ЛЭНС, порошок лиофилизированный для приготовления инъекционного раствора 0,5мг, производства Лэнс- Фарм (Россия)) и циклофосфана (Циклофосфан-ЛЭНС, порошок лиофилизированный для приготовления инъекционного раствора 200 мг, производства Лэнс-Фарм (Россия)) взяты из прайс-листа аптеки общего профиля «Диасфарм "На Полянке"», стоимость сарколитина (сарколитин К-9) - из прайс-листа ООО «Фармбиомедсервис».

препарат

форма

выпуска

стоимость упаковки, руб

необходимое

количество

стоимость одного курса, руб

винкристин

флакон 0,5 мг

150

0,48 мг

144,0

циклофосфан

флакон 200 мг

89

240 мг

106,8

сарколитин

флакон 2,0 мл

60

1,5 мл

45,0

суммарная стоимость курса лечения опытной собаки: 144,0+106,8+45,0= 295,8 руб

14,0+106,8+45,0= 295,8 руб

суммарная стоимость курса лечения контрольной собаки: 144,0+106,8 = 250,8 руб

                                             

Таким образом, получается, что один курс лечения контрольной собаки стоит дешевле, но это не означает, что такое лечение выгоднее. Если считать по среднему числу курсов (см. табл.1), то общая стоимость лечения будет составлять 3,3х295,8 =976,14 руб для опытной собаки и 4,7х250,8=1178,76 руб для контрольной собаки, т.е. уже дороже на 202,62 руб, что явно превышает стоимость сарколитина.

Можно посчитать стоимость лечения каждой группы, но мы немного изменили условия. Мы взяли группы по 10 условных собак одинакового веса (30 кг), чтобы учитывать только продолжительность лечения: динамику выздоровления собак контрольной и опытной групп (см. рис. 2) мы сохранили. Тогда стоимость лечения контрольной группы составит 11787,60 руб, а опытной - 10057,2 руб. Но и это еще не все: в контрольной группе выздоровели только 4 собаки, еще шести пришлось делать электрокоагуляцию, а эти расходы мы здесь не учитывали.

Таким образом, применение сарколитина в качестве модулятора активности химиопрепаратов:

  • повышает эффективность химиопрепаратов до 98-100%;
  • устраняет их миелотоксическое действие;
  • повышает переносимость лечения в целом;
  • сокращает число курсов химиотерапии и общую продолжительность лечения;
  • делает ненужным дополнительный метод лечения (электрокоагуляцию);
  • экономически более выгодно.

 

Литература

  1. Мосин В.А., Кругляк Е.Б., Стерлина Т.С. и др. Действие авермектинов на клетки лимфолейкоза in vitro.Антибиотики и химиотер 1999; 44:6:16-20.
  2. Мосин В.А., Кругляк Е.Б., Стерлина Т.С. и др. Цитостатическое и цитотоксическое действие авермектинов на опухолевые клетки. Антибиотики и химиотер 2000; 45:10:10-14.
  3. Мосин В.А., Дриняев В.А., Кокоз Ю.М. и др. Средство, усиливающее противоопухолевую активность химиопрепаратов, и способ лечения онкологических заболеваний. Патент RU 2250775.
  4. Корыстов Ю.Н., Ермакова Н.В., Шапошникова В.В. и др. Авермектины увеличивают чувствительность клеток лимфолейкоза Р-388 к винкристину. Биол. мембраны 2004; 21:3: 214-219.
  5. Корыстов Ю.Н., Шапошникова В.В, Ермакова Н.В., Кублик Л.Н. и др. Модификация авермектинами чувствительности клеток Нер-2 к таксолу и винкристину. Биол. мембраны. 2004; 21:3:220-224.
  6. Drinyaev V.A., Mosin V.A., Kruglyak Е.В., et al. Antitumor effect of avermectins.Eur.J.Pharmacol. 2004; 501:19-23.
  7. Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных. Регистрационный номер ПВР-2-5.9/02462 от 16 марта 2010 года.
  8. Свирновский А.И., Еригорович С.А. Плейотропная резистентность опухолевых клеток к терапевтическим воздействиям при В-клеточных лимфопролиферативных заболеваниях. 2005. http://www.mednovosti.by/journal.aspx?article=1014
  9. Korystov Yu.N., Mosin V.A., Shaposhnicova V.V. et al. A comparative study of effects of aversecrin C, abamectin and ivermectin on apoptosis of rat thymocytes indused by radiation and dexamethasone. Acta vet. Brno 1999; 68:23-29.
  10. KokozYu.M., TsyganovaV.G, KorystovaA.F. et al.Selective cytostatic and neurotoxic effects of avermectins and activation of the GABAa receptors. Bioscience Rep 1999; 18:6: 535-546.

 

ris1 sarkolitin

Рис. 1. Динамика изменения размера опухолей в зависимости от схемы лечения.

опыт: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 + сарколитин 0,25 мг/кг;

контроль: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 без сарколитина.

 

ris2 sarkolitin

Рис. 2. Динамика выздоровления собак в зависимости от схемы лечения.

опыт: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 + сарколитин 0,25 мг/кг;

контроль: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 без сарколитина.

 

ris3 sarkolitin

Рис. 3. Динамика изменения содержания в крови собак гемоглобина в зависимости от схемы лечения.

опыт: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 + сарколитин 0,25 мг/кг;

контроль: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 без сарколитина.

 

ris4 sarkolitin

Рис. 4. Динамика изменения содержания в крови собак эритроцитов в зависимости от схемы лечения.

опыт: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 + сарколитин 0,25 мг/кг;

контроль: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 без сарколитина.

 

ris5 sarkolitin

Рис. 5. Динамика изменения содержания в крови собак тромбоцитов в зависимости от схемы лечения.

опыт: винкристин 0,5 мг/м + циклофосфан 250 мг/м + сарколитин 0,25 мг/кг;

контроль: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 без сарколитина.

 

ris6 sarkolitin

Рис. 6. Динамика изменения содержания в крови собак лейкоцитов в зависимости от схемы лечения.

опыт: винкристин 0,5 мг/м + циклофосфан 250 мг/м + сарколитин 0,25 мг/кг;

контроль: винкристин 0,5 мг/м2 + циклофосфан 250 мг/м2 без сарколитина.

 

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Нажимая на кнопку «Отправить», я даю свое согласие на обработку персональных данных